大(Da)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)视(Shi)网(Wang)膜(Mo)微(Wei)血(Xue)管(Guan)内(Nei)皮(Pi)原(Yuan)代(Dai)细(Xi)胞(Bao)注(Zhu)意(Yi)事(Shi)项(Xiang)：(?)

1.收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)后(Hou)，(?)若(Ruo)发(Fa)现(Xian)干(Gan)冰(Bing)已(Yi)挥(Hui)发(Fa)干(Gan)净(Jing)、(?)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)瓶(Ping)盖(Gai)脱(Tuo)落(Luo)、(?)破(Po)损(Sun)及(Ji)细(Xi)胞(Bao)有(You)污(Wu)染(Ran)，(?)请(Qing)立(Li)即(Ji)与(Yu)我(Wo)们(Men)联(Lian)系(Xi)。(?)

2.收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)先(Xian)不(Bu)开(Kai)瓶(Ping)盖(Gai)，(?)瓶(Ping)身(Shen)擦(Ca)拭(Shi)酒(Jiu)精(Jing)后(Hou)放(Fang)在(Zai)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)静(Jing)置(Zhi)2-4小(Xiao)时(Shi)（(?)视(Shi)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)而(?)定(Ding)）(?)稳(Wen)定(Ding)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)。(?)接(Jie)着(Zhuo)在(Zai)倒(Dao)置(Zhi)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)情(Qing)况(Kuang)，(?)并(Bing)对(Dui)细(Xi)胞(Bao)进(Jin)行(Xing)不(Bu)同(Tong)倍(Bei)数(Shu)拍(Pai)照(Zhao)（(?)建(Jian)议(Yi)收(Shou)细(Xi)胞(Bao)时(Shi)就(Jiu)整(Zheng)体(Ti)外(Wai)观(Guan)拍(Pai)一(Yi)张(Zhang)照(Zhao)片(Pian)，(?)观(Guan)察(Cha)培(Pei)养(Yang)基(Ji)的(De)颜(Yan)色(Se)和(He)是(Shi)否(Fou)有(You)漏(Lou)液(Ye)情(Qing)况(Kuang)，(?)随(Sui)后(Hou)在(Zai)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)拍(Pai)下(Xia)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)，(?)100*，(?)200*各(Ge)一(Yi)张(Zhang)）(?)，(?)观(Guan)察(Cha)记(Ji)录(Lu)细(Xi)胞(Bao)在(Zai)运(Yun)输(Shu)过(Guo)程(Cheng)中(Zhong)是(Shi)否(Fou)有(You)污(Wu)染(Ran)情(Qing)况(Kuang)。(?)作(Zuo)为(Wei)我(Wo)方(Fang)进(Jin)行(Xing)销(Xiao)售(Shou)依(Yi)据(Ju)。(?)

3.由(You)于(Yu)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)受(Shou)环(Huan)境(Jing)、(?)操(Cao)作(Zuo)和(He)运(Yun)输(Shu)等(Deng)多(Duo)方(Fang)面(Mian)因(Yin)素(Su)影(Ying)响(Xiang)，(?)故(Gu)本(Ben)公(Gong)司(Si)只(Zhi)保(Bao)证(Zheng)客(Ke)户(Hu)收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)后(Hou)一(Yi)周(Zhou)内(Nei)的(De)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)，(?)故(Gu)客(Ke)户(Hu)需(Xu)要(Yao)售(Shou)后(Hou)时(Shi)需(Xu)出(Chu)示(Shi)收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)的(De)时(Shi)间(Jian)证(Zheng)明(Ming)及(Ji)客(Ke)户(Hu)提(Ti)供(Gong)收(Shou)货(Huo)时(Shi)间(Jian)和(He)发(Fa)现(Xian)问(Wen)题(Ti)后(Hou)客(Ke)服(Fu)人(Ren)员(Yuan)沟(Gou)通(Tong)的(De)时(Shi)间(Jian)证(Zheng)明(Ming)，(?)期(Qi)间(Jian)间(Jian)隔(Ge)时(Shi)间(Jian)不(Bu)能(Neng)大(Da)于(Yu)7天(Tian)。(?)

4.所(Suo)有(You)动(Dong)物(Wu)细(Xi)胞(Bao)均(Jun)视(Shi)为(Wei)有(You)潜(Qian)在(Zai)的(De)生(Sheng)物(Wu)危(Wei)害(Hai)性(Xing)，(?)必(Bi)须(Xu)在(Zai)二(?)级(Ji)生(Sheng)物(Wu)安(An)全(Quan)台(Tai)内(Nei)操(Cao)作(Zuo)，(?)并(Bing)请(Qing)注(Zhu)意(Yi)防(Fang)护(Hu)，(?)所(Suo)有(You)废(Fei)液(Ye)及(Ji)接(Jie)触(Chu)过(Guo)此(Ci)细(Xi)胞(Bao)的(De)器(Qi)皿(Min)需(Xu)要(Yao)灭(Mie)菌(Jun)后(Hou)方(Fang)能(Neng)丢(Diu)弃(Qi)。(?)

细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)方(Fang)法(Fa)；(?)

1、(?)细(Xi)胞(Bao)传(Chuan)代(Dai)：(?)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)达(Da)到(Dao)80-90%时(Shi)即(Ji)可(Ke)传(Chuan)代(Dai)

①(?)弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)上(Shang)清(Qing)，(?)用(Yong)PBS或(Huo)生(Sheng)理(Li)盐(Yan)水(Shui)清(Qing)洗(Xi)1-2次(Ci)；(?)

②(?)加(Jia)入(Ru)2ml0.25%（(?)T25瓶(Ping)）(?)，(?)使(Shi)覆(Fu)盖(Gai)整(Zheng)个(Ge)瓶(Ping)或(Huo)皿(Min)，(?)盖(Gai)好(Hao)放(Fang)入(Ru)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)消(Xiao)化(Hua)；(?)

③(?)1-2min后(Hou)，(?)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)，(?)若(Ruo)大(Da)部(Bu)分(Fen)细(Xi)胞(Bao)回(Hui)缩(Suo)且(Qie)有(You)少(Shao)量(Liang)细(Xi)胞(Bao)脱(Tuo)落(Luo)，(?)轻(Qing)轻(Qing)吹(Chui)打(Da)下(Xia)确(Que)认(Ren)消(Xiao)化(Hua)情(Qing)况(Kuang)后(Hou)加(Jia)入(Ru)*培(Pei)养(Yang)基(Ji)终(Zhong)止(Zhi)消(Xiao)化(Hua)；(?)若(Ruo)细(Xi)胞(Bao)还(Huan)是(Shi)贴(Tie)壁(Bi)，(?)放(Fang)回(Hui)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)继(Ji)续(Xu)消(Xiao)化(Hua)至(Zhi)可(Ke)以(Yi)轻(Qing)轻(Qing)吹(Chui)打(Da)下(Xia)为(Wei)止(Zhi)；(?)

④(?)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)1000RPM左(Zuo)右(You)条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4min，(?)弃(Qi)上(Shang)清(Qing)；(?)

⑤(?)用(Yong)新(Xin)鲜(Xian)培(Pei)养(Yang)基(Ji)重(Zhong)悬(Xuan)后(Hou)加(Jia)入(Ru)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)或(Huo)皿(Min)中(Zhong)，(?)T25培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)加(Jia)6-8ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)；(?)

⑥(?)悬(Xuan)浮(Fu)细(Xi)胞(Bao)直(Zhi)接(Jie)离(Li)心(Xin)收(Shou)集(Ji)，(?)细(Xi)胞(Bao)沉(Chen)淀(Dian)重(Zhong)悬(Xuan)后(Hou)分(Fen)到(Dao)新(Xin)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)。(?)

2、(?)细(Xi)胞(Bao)复(Fu)苏(Su)：(?)

①(?)将(Jiang)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)在(Zai)37℃(?)温(Wen)水(Shui)中(Zhong)快(Kuai)速(Su)摇(Yao)晃(Huang)融(Rong)化(Hua)，(?)时(Shi)间(Jian)1min左(Zuo)右(You)，(?)加(Jia)入(Ru)4-5ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)混(Hun)匀(Yun)。(?)

②(?)在(Zai)1000RPM左(Zuo)右(You)条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4min，(?)弃(Qi)上(Shang)清(Qing),加(Jia)1-2ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)吹(Chui)匀(Yun)，(?)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)，(?)补(Bu)加(Jia)适(Shi)量(Liang)培(Pei)养(Yang)基(Ji)。(?)

3、(?)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)：(?)待(Dai)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)状(Zhuang)态(Tai)良(Liang)好(Hao)时(Shi)进(Jin)行(Xing)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)保(Bao)种(Zhong)

①(?)弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)上(Shang)清(Qing)，(?)用(Yong)PBS或(Huo)生(Sheng)理(Li)盐(Yan)水(Shui)清(Qing)洗(Xi)1-2次(Ci)，(?)加(Jia)入(Ru)1mL 0.25%（(?)T25瓶(Ping)）(?)

②(?)1-2min后(Hou)，(?)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)，(?)大(Da)部(Bu)分(Fen)细(Xi)胞(Bao)回(Hui)缩(Suo)且(Qie)有(You)少(Shao)量(Liang)细(Xi)胞(Bao)脱(Tuo)落(Luo)，(?)轻(Qing)轻(Qing)吹(Chui)打(Da)下(Xia)确(Que)认(Ren)消(Xiao)化(Hua)情(Qing)况(Kuang)后(Hou)加(Jia)入(Ru)*培(Pei)养(Yang)基(Ji)终(Zhong)止(Zhi)消(Xiao)化(Hua)；(?)

③(?)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)1000RPM左(Zuo)右(You)条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4min，(?)弃(Qi)上(Shang)清(Qing)，(?)加(Jia)1ml冻(Dong)存(Cun)液(Ye)重(Zhong)悬(Xuan)细(Xi)胞(Bao)；(?)

④(?)将(Jiang)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)放(Fang)入(Ru)程(Cheng)序(Xu)降(Jiang)温(Wen)盒(He)，(?)放(Fang)入(Ru)-80℃(?)冰(Bing)箱(Xiang)，(?)4小(Xiao)时(Shi)后(Hou)将(Jiang)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)转(Zhuan)入(Ru)液(Ye)氮(Dan)罐(Guan)储(Chu)存(Cun)。(?)