商(Shang)品(Pin)描(Miao)述(Shu)：(?)
产(Chan)品(Pin)名(Ming)称(Cheng) | 大(Da)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)胸(Xiong)腺(Xian)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) | 规(Gui)格(Ge) | 100mL/500mL |
用(Yong)途(Tu) | 仅(Jin)供(Gong)科(Ke)研(Yan)研(Yan)究(Jiu)实(Shi)验(Yan) | 货(Huo)号(Hao) | EY-XP4293 |
由(You)团(Tuan)队(Dui)精(Jing)心(Xin)优(You)化(Hua)，(?)经(Jing)过(Guo)长(Chang)期(Qi)测(Ce)试(Shi)，(?)本(Ben)产(Chan)品(Pin)可(Ke)保(Bao)持(Chi)大(Da)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)胸(Xiong)腺(Xian)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)良(Liang)好(Hao)的(De)生(Sheng)长(Chang)状(Zhuang)态(Tai)。(?)
本(Ben)产(Chan)品(Pin)中(Zhong)已(Yi)包(Bao)含(Han)大(Da)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)胸(Xiong)腺(Xian)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)所(Suo)需(Xu)的(De)各(Ge)种(Zhong)成(Cheng)分(Fen)，(?)无(Wu)需(Xu)添(Tian)加(Jia)任(Ren)何(He)成(Cheng)分(Fen)，(?)可(Ke)直(Zhi)接(Jie)用(Yong)大(Da)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)胸(Xiong)腺(Xian)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)的(De)培(Pei)养(Yang)。(?)
产(Chan)品(Pin)主(Zhu)要(Yao)成(Cheng)分(Fen)
名(Ming)称(Cheng) | 体(Ti)积(Ji) | 浓(Nong)度(Du) | 保(Bao)存(Cun)条(Tiao)件(Jian) |
原(Yuan)代(Dai)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)基(Ji)础(Chu)培(Pei)养(Yang)基(Ji) | 500mL | 1×(?) | 4℃(?)、(?)避(Bi)光(Guang) |
原(Yuan)代(Dai)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)添(Tian)加(Jia)剂(Ji) | 5mL | 100×(?) | -20℃(?)、(?)避(Bi)光(Guang) |
胎(Tai)牛(Niu)血(Xue)清(Qing)（(?)FBS）(?) | 25mL | 终(Zhong)浓(Nong)度(Du)5% | -20℃(?)、(?)避(Bi)光(Guang) |
双(Shuang)抗(Kang)（(?)青(Qing)霉(Mei)su/链(Lian)霉(Mei)su，(?)P/S）(?) | 5mL | 100×(?) | -20℃(?)、(?)避(Bi)光(Guang) |
运(Yun)输(Shu)和(He)保(Bao)存(Cun)
运(Yun)输(Shu)：(?)放(Fang)置(Zhi)于(Yu)含(Han)有(You)生(Sheng)物(Wu)冰(Bing)袋(Dai)的(De)保(Bao)温(Wen)箱(Xiang)中(Zhong)低(Di)温(Wen)运(Yun)输(Shu)
保(Bao)存(Cun)方(Fang)法(Fa)：(?)按(An)照(Zhao)对(Dui)应(Ying)保(Bao)存(Cun)条(Tiao)件(Jian)保(Bao)存(Cun)12个(Ge)月(Yue)，(?)配(Pei)置(Zhi)好(Hao)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)2℃(?)～(?)8℃(?),保(Bao)存(Cun)2个(Ge)月(Yue)；(?)
质(Zhi)量(Liang)控(Kong)制(Zhi)
检(Jian)测(Ce)项(Xiang)目(Mu) | 质(Zhi)量(Liang)控(Kong)制(Zhi) |
澄(Cheng)清(Qing)度(Du) | 澄(Cheng)清(Qing) |
PH | 7.3±0.2 |
内(Nei)毒(Du)素(Su)含(Han)量(Liang) (EU/mL) | ≤(?)10 |
无(Wu)菌(Jun)检(Jian)测(Ce) | 细(Xi)菌(Jun) | 阴(Yin)性(Xing) |
真(Zhen)菌(Jun) | 阴(Yin)性(Xing) |
支(Zhi)原(Yuan)体(Ti) | 阴(Yin)性(Xing) |
细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)试(Shi)验(Yan) | 细(Xi)胞(Bao)形(Xing)态(Tai) | 正(Zheng)常(Chang) |
细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)实(Shi)验(Yan) | 合(He)格(Ge) |
注(Zhu)意(Yi)事(Shi)项(Xiang)：(?)
仅(Jin)限(Xian)科(Ke)研(Yan)用(Yong)。(?)
培(Pei)养(Yang)体(Ti)系(Xi)中(Zhong)的(De)一(Yi)些(Xie)组(Zu)分(Fen)是(Shi)对(Dui)人(Ren)体(Ti)健(Jian)康(Kang)有(You)害(Hai)的(De)物(Wu)质(Zhi)，(?)请(Qing)不(Bu)要(Yao)用(Yong)暴(Bao)露(Lu)的(De)皮(Pi)肤(Fu)接(Jie)触(Chu)培(Pei)养(Yang)体(Ti)系(Xi)的(De)液(Ye)体(Ti)和(He)有(You)培(Pei)养(Yang)体(Ti)系(Xi)的(De)液(Ye)体(Ti)残(Can)留(Liu)的(De)容(Rong)器(Qi)内(Nei)部(Bu)；(?)这(Zhe)部(Bu)分(Fen)有(You)害(Hai)物(Wu)质(Zhi)的(De)浓(Nong)度(Du)和(He)危(Wei)害(Hai)性(Xing)都(Du)较(Jiao)低(Di)，(?)如(Ru)有(You)接(Jie)触(Chu)，(?)立(Li)即(Ji)用(Yong)自(Zi)来(Lai)水(Shui)冲(Chong)洗(Xi)即(Ji)可(Ke)。(?)
细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)步(Bu)骤(Zhou)：(?)
一(Yi)．(?)培(Pei)养(Yang)基(Ji)及(Ji)培(Pei)养(Yang)冻(Dong)存(Cun)条(Tiao)件(Jian)准(Zhun)备(Bei)：(?)
1）(?) 准(Zhun)备(Bei)DMEM-H培(Pei)养(Yang)基(Ji)(添(Tian)加(Jia)NaHCO3 1.5g/L)，(?)90%；(?)胎(Tai)牛(Niu)血(Xue)清(Qing)，(?)10%。(?)也(Ye)可(Ke)根(Gen)据(Ju)实(Shi)验(Yan)需(Xu)要(Yao)选(Xuan)择(Ze)悬(Xuan)浮(Fu)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)使(Shi)293T细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)浮(Fu)生(Sheng)长(Chang)。(?)
2）(?) 培(Pei)养(Yang)条(Tiao)件(Jian)：(?) 气(Qi)相(Xiang)：(?)空(Kong)气(Qi)，(?)95%；(?)二(?)氧(Yang)化(Hua)碳(Tan)，(?)5%。(?) 温(Wen)度(Du)：(?)37摄(She)氏(Shi)度(Du)，(?)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)湿(Shi)度(Du)为(Wei)70%-80%。(?)
3）(?) 冻(Dong)存(Cun)液(Ye)：(?)90%培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)10%DMSO，(?)现(Xian)用(Yong)现(Xian)配(Pei)。(?)液(Ye)氮(Dan)储(Chu)存(Cun)。(?)
二(?)．(?) 细(Xi)胞(Bao)处(Chu)理(Li)：(?)
1）(?) 复(Fu)苏(Su)细(Xi)胞(Bao)：(?)将(Jiang)含(Han)有(You)1mL细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)的(De)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)在(Zai)37℃(?)水(Shui)浴(Yu)中(Zhong)迅(Xun)速(Su)摇(Yao)晃(Huang)解(Jie)冻(Dong)，(?)加(Jia)入(Ru)4mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)混(Hun)合(He)均(Jun)匀(Yun)。(?)在(Zai)1000RPM条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4分(Fen)钟(Zhong)，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)补(Bu)加(Jia)1-2mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)吹(Chui)匀(Yun)。(?)然(Ran)后(Hou)将(Jiang)所(Suo)有(You)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)培(Pei)养(Yang)过(Guo)夜(Ye)（(?)或(Huo)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)10cm皿(Min)中(Zhong)，(?)加(Jia)入(Ru)约(Yue)8ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)培(Pei)养(Yang)过(Guo)夜(Ye)）(?)。(?)第(Di)二(?)天(Tian)换(Huan)液(Ye)并(Bing)检(Jian)查(Cha)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)。(?)
2）(?) 细(Xi)胞(Bao)传(Chuan)代(Dai)：(?)如(Ru)果(Guo)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)达(Da)80%-90%，(?)即(Ji)可(Ke)进(Jin)行(Xing)传(Chuan)代(Dai)培(Pei)养(Yang)。(?)
对(Dui)于(Yu)贴(Tie)壁(Bi)细(Xi)胞(Bao)，(?)传(Chuan)代(Dai)可(Ke)参(Can)考(Kao)以(Yi)下(Xia)方(Fang)法(Fa)：(?)
1. 弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)上(Shang)清(Qing)，(?)用(Yong)不(Bu)含(Han)钙(Gai)、(?)镁(Mei)离(Li)子(Zi)的(De)PBS润(Run)洗(Xi)细(Xi)胞(Bao)1-2次(Ci)。(?)
2. 加(Jia)2ml消(Xiao)化(Hua)液(Ye)（(?)0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）(?)于(Yu)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)，(?)置(Zhi)于(Yu)37℃(?)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)中(Zhong)消(Xiao)化(Hua)1-2分(Fen)钟(Zhong)，(?)然(Ran)后(Hou)在(Zai)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)消(Xiao)化(Hua)情(Qing)况(Kuang)，(?)若(Ruo)细(Xi)胞(Bao)大(Da)部(Bu)分(Fen)变(Bian)圆(Yuan)并(Bing)脱(Tuo)落(Luo)，(?)迅(Xun)速(Su)拿(Na)回(Hui)操(Cao)作(Zuo)台(Tai)，(?)轻(Qing)敲(Qiao)几(Ji)下(Xia)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)后(Hou)加(Jia)少(Shao)量(Liang)培(Pei)养(Yang)基(Ji)终(Zhong)止(Zhi)消(Xiao)化(Hua)。(?)
3. 按(An)6-8ml/瓶(Ping)补(Bu)加(Jia)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)轻(Qing)轻(Qing)打(Da)匀(Yun)后(Hou)吸(Xi)出(Chu)，(?)在(Zai)1000RPM条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4分(Fen)钟(Zhong)，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)补(Bu)加(Jia)1-2mL培(Pei)养(Yang)液(Ye)后(Hou)吹(Chui)匀(Yun)。(?)
4. 将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)按(An)1：(?)2到(Dao)1：(?)5的(De)比(Bi)例(Li)分(Fen)到(Dao)新(Xin)的(De)含(Han)8ml培(Pei)养(Yang)基(Ji)的(De)新(Xin)皿(Min)中(Zhong)或(Huo)者(Zhe)瓶(Ping)中(Zhong)。(?)
3）(?)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)：(?)待(Dai)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)状(Zhuang)态(Tai)良(Liang)好(Hao)时(Shi)，(?)可(Ke)进(Jin)行(Xing)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)。(?)贴(Tie)壁(Bi)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)时(Shi)，(?)弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)加(Jia)入(Ru)少(Shao)量(Liang)，(?)细(Xi)胞(Bao)变(Bian)圆(Yuan)脱(Tuo)落(Luo)后(Hou)，(?)加(Jia)入(Ru)约(Yue)1ml含(Han)血(Xue)清(Qing)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)加(Jia)入(Ru)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)中(Zhong)，(?)再(Zai)添(Tian)加(Jia)10%DMSO后(Hou)进(Jin)行(Xing)冻(Dong)存(Cun)。(?)
冷(Leng)冻(Dong)保(Bao)存(Cun)细(Xi)胞(Bao)之(Zhi)方(Fang)法(Fa)？(?)
冷(Leng)冻(Dong)保(Bao)存(Cun)方(Fang)法(Fa)一(Yi): 冷(Leng)冻(Dong)管(Guan)置(Zhi)于(Yu)4℃(?) 30~60 分(Fen)钟(Zhong)→(?) （(?)-20 ℃(?)30 分(Fen)钟(Zhong)*）(?) →(?) -80 ℃(?)16~18 小(Xiao)时(Shi)（(?)或(Huo)隔(Ge)夜(Ye)）(?) →(?) 液(Ye)氮(Dan)槽(Cao)vaporphase 长(Chang)期(Qi)储(Chu)存(Cun)。(?)
冷(Leng)冻(Dong)保(Bao)存(Cun)方(Fang)法(Fa)二(?): 冷(Leng)冻(Dong)管(Guan)置(Zhi)于(Yu)已(Yi)设(She)定(Ding)程(Cheng)序(Xu)之(Zhi)可(Ke)程(Cheng)序(Xu)降(Jiang)温(Wen)机(Ji)中(Zhong)每(Mei)分(Fen)钟(Zhong)降(Jiang)1-3 ℃(?) 至(Zhi)80 ℃(?) 以(Yi)下(Xia)，(?) 再(Zai)放(Fang)入(Ru)液(Ye)氮(Dan)槽(Cao)vapor phase长(Chang)期(Qi)储(Chu)存(Cun)。(?)-20 ℃(?)不(Bu)可(Ke)超(Chao)过(Guo)1 小(Xiao)时(Shi)，(?) 以(Yi)防(Fang)止(Zhi)冰(Bing)晶(Jing)过(Guo)大(Da)，(?)造(Zao)成(Cheng)细(Xi)胞(Bao)大(Da)量(Liang)死(Si)亡(Wang)，(?)亦(Yi)可(Ke)跳(Tiao)过(Guo)此(Ci)步(Bu)骤(Zhou)直(Zhi)接(Jie)放(Fang)入(Ru)-80℃(?) 冰(Bing)箱(Xiang)中(Zhong)，(?)惟(Wei)存(Cun)活(Huo)率(Lu)稍(Shao)微(Wei)降(Jiang)低(Di)一(Yi)些(Xie)。(?)
公(Gong)司(Si)正(Zheng)在(Zai)出(Chu)售(Shou)的(De)产(Chan)品(Pin)：(?)
人(Ren)十(Shi)二(?)指(Zhi)肠(Chang)腺(Xian)癌(Ai) | 人(Ren)原(Yuan)代(Dai)脐(Qi)动(Dong)脉(Mai)平(Ping)滑(Hua)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)膀(Bang)胱(Guang)癌(Ai)细(Xi)胞(Bao)（(?)红(Hong)色(Se)荧(Ying)光(Guang)蛋(Dan)白(Bai)标(Biao)记(Ji)) | 小(Xiao)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)神(Shen)经(Jing)干(Gan)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)外(Wai)周(Zhou)淋(Lin)巴(Ba)细(Xi)胞(Bao) | 小(Xiao)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)肝(Gan)内(Nei)胆(Dan)管(Guan)上(Shang)皮(Pi)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)上(Shang)皮(Pi)性(Xing)卵(Luan)巢(Chao)癌(Ai)细(Xi)胞(Bao) | 小(Xiao)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)视(Shi)网(Wang)膜(Mo)前(Qian)体(Ti)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)肝(Gan)癌(Ai)细(Xi)胞(Bao)亚(Ya)型(Xing) | 小(Xiao)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)心(Xin)肌(Ji)干(Gan)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)结(Jie)直(Zhi)肠(Chang)癌(Ai)氟(Fu)耐(Nai)药(Yao)株(Zhu) | 兔(Tu)原(Yuan)代(Dai)肾(Shen)上(Shang)腺(Xian)髓(Sui)质(Zhi)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)浆(Jiang)细(Xi)胞(Bao)白(Bai)血(Xue)病(Bing) | 人(Ren)原(Yuan)代(Dai)胎(Tai)盘(Pan)绒(Rong)毛(Mao)膜(Mo)间(Jian)质(Zhi)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)结(Jie)肠(Chang)癌(Ai)耐(Nai)药(Yao)株(Zhu) | 兔(Tu)原(Yuan)代(Dai)脑(Nao)皮(Pi)层(Ceng)神(Shen)经(Jing)元(Yuan)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)肾(Shen)上(Shang)皮(Pi)细(Xi)胞(Bao) | 小(Xiao)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)海(Hai)绵(Mian)体(Ti)平(Ping)滑(Hua)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)胎(Tai)盘(Pan)细(Xi)胞(Bao)（(?)有(You)限(Xian)细(Xi)胞(Bao)系(Xi)）(?) | 人(Ren)原(Yuan)代(Dai)肺(Fei)动(Dong)脉(Mai)高(Gao)压(Ya)血(Xue)管(Guan)内(Nei)皮(Pi)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
EB病(Bing)毒(Du)转(Zhuan)化(Hua)的(De)绒(Rong)猴(Hou)淋(Lin)巴(Ba)细(Xi)胞(Bao) | 人(Ren)原(Yuan)代(Dai)角(Jiao)质(Zhi)形(Xing)成(Cheng)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)眼(Yan)小(Xiao)梁(Liang)网(Wang)细(Xi)胞(Bao) | 人(Ren)原(Yuan)代(Dai)心(Xin)脏(Zang)微(Wei)血(Xue)管(Guan)周(Zhou)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)脐(Qi)静(Jing)脉(Mai)内(Nei)皮(Pi)细(Xi)胞(Bao)（(?)红(Hong)色(Se)荧(Ying)光(Guang)蛋(Dan)白(Bai)标(Biao)记(Ji)）(?) | 人(Ren)原(Yuan)代(Dai)宫(Gong)颈(Jing)上(Shang)皮(Pi)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)小(Xiao)细(Xi)胞(Bao)肺(Fei)癌(Ai) | 大(Da)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)胸(Xiong)腺(Xian)成(Cheng)纤(Xian)维(Wei)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji)兔(Tu)原(Yuan)代(Dai)脊(Ji)髓(Sui)星(Xing)形(Xing)胶(Jiao)质(Zhi)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
人(Ren)T淋(Lin)巴(Ba)瘤(Liu)细(Xi)胞(Bao) | 小(Xiao)鼠(Shu)原(Yuan)代(Dai)膈(Ge)肌(Ji)细(Xi)胞(Bao)专(Zhuan)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji) |
操(Cao)作(Zuo)要(Yao)点(Dian)：(?)
1）(?)将(Jiang)培(Pei)养(Yang)基(Ji)在(Zai)37℃(?)水(Shui)浴(Yu)锅(Guo)预(Yu)热(Re)；(?)准(Zhun)备(Bei)一(Yi)个(Ge)15mL无(Wu)菌(Jun)的(De)离(Li)心(Xin)管(Guan)，(?)加(Jia)入(Ru)8mL预(Yu)热(Re)培(Pei)养(Yang)基(Ji)。(?)
2）(?)将(Jiang)冻(Dong)存(Cun)细(Xi)胞(Bao)从(Cong)液(Ye)氮(Dan)罐(Guan)中(Zhong)取(Qu)出(Chu)，(?)快(Kuai)速(Su)放(Fang)入(Ru)37℃(?)水(Shui)浴(Yu)锅(Guo)中(Zhong)复(Fu)温(Wen)（(?)可(Ke)准(Zhun)备(Bei)一(Yi)洁(Jie)净(Jing)的(De)烧(Shao)杯(Bei)，(?)装(Zhuang)满(Man)37℃(?)的(De)水(Shui)，(?)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)取(Qu)出(Chu)后(Hou)迅(Xun)速(Su)放(Fang)入(Ru)烧(Shao)杯(Bei)内(Nei)，(?)再(Zai)逐(Zhu)步(Bu)转(Zhuan)移(Yi)到(Dao)水(Shui)浴(Yu)锅(Guo)中(Zhong)）(?)。(?)轻(Qing)轻(Qing)晃(Huang)动(Dong)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)能(Neng)在(Zai)1~2min内(Nei)解(Jie)冻(Dong)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)能(Neng)尽(Jin)快(Kuai)通(Tong)过(Guo)易(Yi)受(Shou)损(Sun)的(De)温(Wen)度(Du)段(Duan)（(?)-5~0℃(?)）(?)。(?)注(Zhu)意(Yi)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)管(Guan)口(Kou)不(Bu)能(Neng)没(Mei)入(Ru)水(Shui)中(Zhong)，(?)避(Bi)免(Mian)引(Yin)起(Qi)污(Wu)染(Ran)。(?)
3）(?)用(Yong)75%酒(Jiu)精(Jing)擦(Ca)拭(Shi)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)后(Hou)再(Zai)置(Zhi)于(Yu)超(Chao)净(Jing)台(Tai)内(Nei)，(?)将(Jiang)管(Guan)内(Nei)细(Xi)胞(Bao)转(Zhuan)移(Yi)至(Zhi)准(Zhun)备(Bei)好(Hao)的(De)离(Li)心(Xin)管(Guan)内(Nei)，(?)轻(Qing)轻(Qing)吹(Chui)打(Da)液(Ye)体(Ti)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)均(Jun)匀(Yun)分(Fen)散(San)，(?)降(Jiang)低(Di)DMSO浓(Nong)度(Du)，(?)吹(Chui)打(Da)时(Shi)避(Bi)免(Mian)产(Chan)生(Sheng)气(Qi)泡(Pao)。(?)用(Yong)新(Xin)鲜(Xian)培(Pei)养(Yang)基(Ji)洗(Xi)管(Guan)壁(Bi)2次(Ci)，(?)均(Jun)转(Zhuan)移(Yi)至(Zhi)离(Li)心(Xin)管(Guan)内(Nei)。(?)
4）(?)800rpm离(Li)心(Xin)5min，(?)弃(Qi)上(Shang)清(Qing)，(?)加(Jia)入(Ru)新(Xin)鲜(Xian)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)吹(Chui)打(Da)制(Zhi)成(Cheng)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)。(?)
5）(?)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)转(Zhuan)移(Yi)至(Zhi)T25细(Xi)胞(Bao)瓶(Ping)内(Nei)，(?)补(Bu)加(Jia)适(Shi)量(Liang)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)轻(Qing)轻(Qing)晃(Huang)动(Dong)细(Xi)胞(Bao)瓶(Ping)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)分(Fen)布(Bu)均(Jun)匀(Yun)，(?)放(Fang)入(Ru)温(Wen)箱(Xiang)内(Nei)培(Pei)养(Yang)。(?)
6）(?)第(Di)二(?)天(Tian)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)贴(Tie)壁(Bi)生(Sheng)长(Chang)情(Qing)况(Kuang)，(?)换(Huan)新(Xin)鲜(Xian)培(Pei)养(Yang)基(Ji)以(Yi)去(Qu)除(Chu)死(Si)细(Xi)胞(Bao)。(?)继(Ji)续(Xu)培(Pei)养(Yang)，(?)待(Dai)细(Xi)胞(Bao)长(Chang)至(Zhi)80~90%汇(Hui)合(He)时(Shi)正(Zheng)常(Chang)传(Chuan)代(Dai)。(?)一(Yi)般(Ban)刚(Gang)复(Fu)苏(Su)的(De)细(Xi)胞(Bao)需(Xu)经(Jing)过(Guo)2~3次(Ci)传(Chuan)代(Dai)，(?)细(Xi)胞(Bao)活(Huo)力(Li)恢(Hui)复(Fu)后(Hou)才(Cai)能(Neng)进(Jin)行(Xing)后(Hou)续(Xu)的(De)实(Shi)验(Yan)。(?)
级(Ji)会(Hui)员(Yuan)_a.png)